Раздавленная капля микробиология. Определение общего количества микроорганизмов (КОЕ). Биологический метод исследования

Различные методики по восстановлению кожи, ее красоты, эластичности, молодости выделяют биоревитализацию, как самую безопасную. Одним из популярных препаратов, используемых во время процедуры, стал Вискодерм. Он выгодно отличается своим составом и действием.

Описание препарата Вискодерм

Главным действующим компонентом инъекционного препарата, по консистенции напоминающего гель или вязкую жидкость, является гиалуроновая кислота. Производителем продукта является итальянская компания IBSA Farmaceutici. Выход Вискодерма на российский рынок совпал с завоеванием и европейского рынка в 2009 году. Одобрение американского агентства, следящего за качеством медикаментов, препарат получил только в 2014 году.

Линейка препаратов

Вискодерм представлен тремя видами препарата с различными концентрациями гиалуроновой кислоты:

  1. Вискодерм 0,8%ГК отличается минимальным содержанием действующего вещества. Инъекции вводятся на уровне эпидермиса. Применение состава рекомендуется для коррекции ранних возрастных изменений, уничтожения следов стресса, курения, излишней любви к солнцу. Этот вариант препарата удачно подходит для заботы о нежной коже вокруг глаз.
  2. Вискодерм 1,6%ГК предназначен для борьбы со средними признаками старения. Инъекции вводятся в верхний слой дермы, что позволяет избавиться от обезвоживания кожи, подготовить ее к пластическим операциям и восстановить после них. Эта форма выпуска используется для сохранения молодости рук и зоны декольте.
  3. Вискодерм 2.0%ГК вводится в средний и глубокий слой дермы для коррекции серьезных возрастных изменений. С его помощью удается устранить глубокие морщины, старые шрамы и растяжки.

Состав:

  • Основным компонентом является синтетически полученная гиалуроновая кислота. Она освобождена от белковых соединений, способных спровоцировать развитие аллергической реакции.
  • Минеральные элементы представлены медью, марганцем, цинком, железом, оловом и кальцием.
  • Аминокислоты, среди которых изолейцин, аланин, аргинин, глицин.
  • Витамины группы В, представленные фолиевой кислотой, инозитолом, холинхлоридом.


Показания к применению

Инъекции используются при:

  • Проявлении первых признаков старения кожи с появлением мелких морщинок.
  • Для борьбы с явно выраженными признаками старения.
  • Обращаться за помощью к уникальному средству следует при потере кожей тонуса и упругости, появлении глубоких морщин.

Показаниями также являются:

  • обезвоживание кожных покровов;
  • чрезмерная сухость от природы;
  • шрамы от акне.

Применять препарат допустимо на любом участке тела, требующем дополнительной заботы.

Противопоказания:

  • Необходимо забыть об инъекциях девушкам в возрасте младше 25 лет, а также беременным и кормящим мамочкам.
  • Предварительно необходимо пройти тест на свертываемость крови. При низком показателе процедура проводиться не будет.
  • Также следует заранее провести тест на выявление аллергической реакции на саму гиалуроновую кислоту и местные анестетики. Положительная реакция означает невозможность проведения процедуры без серьезного риска для здоровья, красоты и даже жизни клиентки.
  • Непременным противопоказанием к вводу косметического средства является наличие системных заболеваний соединительной ткани, инфекционные заболевания, онкология, аутоиммунные патологии.


Эффект от применения

Гиалуроновая кислота – элемент, содержащийся в коже. От него зависит эффективность работы механизма по созданию коллагена. Без последнего невозможно добиться упругости и эластичности:

  • После применения кожа заметно разглаживается, ее рельеф становится ровным. Исчезают морщинки, морщины, складки и небольшие рубцы.
  • Капиллярная сеть обретает надежного защитника, что снижает активность купероза, скрадывает следы его деятельности. Восстанавливается здоровая окраска лица, при этом участки с гиперпигментацией утрачивают свою интенсивность.
  • Воздействие сокращает размер пор, снижает интенсивность выделения кожного сала, регулирует работу сальных желез, улучшает состояние волос.
  • Агрессивное химическое воздействие, в том числе и объемное моделирование, пилинг требуют оптимизации достигнутых результатов. Вискодерм превосходно справляется с задачей.
  • Воздействие на тело лазером и пластическая хирургия требуют серьезного реабилитационного периода. Значительно сократить его продолжительность помогают инъекции.

Способы введения

В зависимости от состояния кожи и преследуемой цели специалист-косметолог может выбрать определенную глубину введения соответствующей формы препарата:

  • Для воздействия на верхний слой кожи достаточно ввести препарат в эпидермис. Это окажет необходимую стимуляцию обменных процессов, необходимых для разглаживания мелких морщин и возвращения сияющего цвета коже.
  • Для воздействия на способность к регенерации кожи инъекции проводят в верхний слой дермы.
  • Глубокое воздействие необходимо для провоцирования выработки собственной эндогенной кислоты, необходимой в борьбе с глубокими морщинами.

Важно учитывать, что не существует и единого для всех пациентов курса. После первых инъекций делается перерыв, а затем вводится новая порция уникального средства. Продолжительность курса зависит исключительно от результата. Его можно продолжать до тех пор, пока из зеркала не начнет смотреть то самое лицо, о котором мечталось.

В зависимости от индивидуальных особенностей продолжительность перерыва может составлять 2 недели или 1 месяц.

Различны и объемы препарата, используемые за время 1 сеанса. Все зависит от площади обрабатываемых участков.


Плюсы и минусы применения препарата

Вискодерм в кратчайшие сроки увлажняет кожу, улучшает ее состояние. Видимый эффект достигается уже с первого применения, полный курс обеспечивает длительный результат. Жидкость прекрасно сочетается со многими косметическими процедурами, значительно облегчая их.

Большим плюсом является и высокое качество всех элементов, входящих в состав, что обеспечивает безопасную работу с людьми с разным типом кожи и разных возрастов.

После использования самого серьезного из линейки препаратов возникает вероятность образования синяков и отека. Выходить в таком виде на люди неприятно, поэтому придется запереться дома на несколько дней. Есть вероятность развития побочных эффектов или осложнений процедуры. Также к минусам следует отнести необходимость соблюдать определенный ритуал, после проведения процедуры и даже до нее.

Как проводится биоревитализация Вискодермом – пошаговая инструкция

  1. До начала процедуры изучается болевой порог клиента. В случае если он оказывается низким используют соответствующие обезболивающие препараты местного действия.
  2. Крем, в чью задачу входит притупление болевого синдрома, наносят на кожу и оставляют на полчаса. При необходимости усилить действие анестетика поверх мази накладывают пленку. После завершения предварительной подготовки кожу тщательно очищают от крема и обрабатывают антисептиком.
  3. Дальше происходит непосредственное введение жидкости под кожу. Для этого используется одноразовый шприц и тонкая игла. Техника введения средства определяется его видом и участком применения. Для биоревитализации подходит папульная техника. Для ухода за областью вокруг глаз применяется техника раздавленной капли. Ее очевидным преимуществом перед первой техникой становится быстрое исчезновение отеков.
  4. Линейная техника применяется для непосредственного воздействия на морщины.
  5. В кабинете специалиста на обработку лица потребуется около 30 минут в общей сложности. При желании позаботиться еще и о декольте, руках, шее придется устроиться поудобнее, ведь процедура отнимет не менее одного часа.
  6. Места проколов дополнительно обрабатываются антисептиком уже после введения косметического состава под кожу. Для дополнительной защиты запрещается использовать какие-либо кремы или мази непосредственно после завершения сеанса ввода препарата.


До того как идти в кабинет косметолога, рекомендуется посетить своего терапевта и проконсультироваться с ним о предстоящем мероприятии. По его направлению нужно будет сдать анализы для исследования состояния организма, чтобы убедиться в отсутствии инфекции.

Полезно посетить дерматолога для общего осмотра, а в случае появления сыпи, покраснений шелушения кожи такой визит просто необходим. Для предупреждения осложнений, лучше исключить все неблагоприятные факторы.

После процедуры следует несколько ограничить свою жизнь во избежание занесения инфекции в полученные ранки. Меры предосторожности сводятся:

  • К отказу от посещения пляжа, бассейна или купания в водоеме в течение первых четырех дней после инъекций.
  • В первые три дня ни о какой косметике не может быть и речи. Затем можно потихоньку начинать без злоупотребления декоративной. Нанесение привычного макияжа становится допустимым не ранее, чем на шестой день.
  • К запрету на использование любых мазей, компрессов или растворов для рассасывания синяков. Под запрет попадают все местные средства лекарственного характера.

Инъекции провоцируют образование отека. Чтобы не усугублять его придется постараться и не находиться в наклон на протяжении четырех суток с момента завершения процедуры. Физическая активность с серьезными нагрузками, а также посещение спортзала и сауны, в первые четыре дня после введения препарата способна нанести серьезный ущерб красоте. Период адаптации совершенно небольшой, поэтому серьезно себя ограничивать и накладывать жесткие запреты нет необходимости.

Возможные осложнения и побочные эффекты

  • Небольшая неприятность в виде небольшого отека неизбежна, но исчезнет она самостоятельно уже через пару дней.
  • Появление синяков в результате глубокого воздействия омрачит впечатление от полученного результата не меньше, чем на четыре дня. В некоторых случаях следует набраться терпения на целую неделю.
  • Первые два дня самые сложные и тяжелые. Реагируя на вмешательство, организм часто отзывается появлением жжения, зуда или среднего покалывания на разных участках кожи. места проколов напоминают о себе покраснением.
  • Воздействие солнечных лучей или лампы солярия на измененную кожу в течение первых пяти дней способно привести к повышенной пигментации и развитию воспаления.
  • Главным осложнением считается развитие фиброза ткани.

Стоимость препарата

Минимальная цена сеанса с использованием Вискодерма составляет 7000 рублей. Все зависит от количества препарата и его вида. Самым доступным является Вискодерм 0,8%ГК. Цена сеанса обычно не поднимается выше 11 000 рублей. Для состава с более высоким содержанием гиалуроновой кислоты верхним порогом является сумма в 15 тыс. рублей за сеанс. Применение Вискодерма 2.0 требует серьезных расходов. Цена сеанса колеблется в пределах 10-21 тыс. рублей.


РАЗДАВЛЕННАЯ КАПЛЯ - метод приготовления препаратов для микроскопического исследования биологических объектов. В исследовательской практике Р. к. используют при изучении формы, размера и расположения микроорганизмов, выявления подвижности бактерий, при наблюдении за ростом и размножением микроорганизмов, для изучения реакций микроорганизмов на хим. соединения (хемотаксис) и физические факторы. В практике мед. микробиологии этот метод применяют при микроскопическом исследовании материала от больных для обнаружения возбудителей заболеваний, обладающих специфической морфологией,- простейших, спирохет, грибков. Методом Р. к. и его модификациями пользуются также при микроскопическом исследовании кала и других выделений на яйца и личинки гельминтов.

Для приготовления препарата готовят взвесь исследуемого материала в изотоническом р-ре хлорида натрия или водопроводной воде, добавляя вещества, облегчающие процесс микроскопии (красители, осветлители и др.); используют также культуры микроорганизмов на жидких или полужидких питательных средах, биол, жидкости. Каплю материала помещают на предметное стекло и сверху кладут покровное стекло, избегая появления в препарате пузырьков воздуха. Жидкость не должна выступать за пределы покровного стекла. Щель между предметным и покровным стеклами может быть герметизирована вазелином или смесью, состоящей из равных объемов вазелина и парафина. При исследовании быстродвижущихся микроорганизмов, чтобы уменьшить скорость их движения к суспензии можно добавить метилцеллюлозу. В этом случае можно наблюдать движения жгутиков. При микроскопии живых клеток возможно использование прижизненных (витальных) красителей - метиленового синего, нейтрального красного и других (в разведении 1:1000 - 1:10 000), повышающих контрастность препаратов и позволяющих выявить внутреннее строение простейших, грибков и др.

В зависимости от объекта и целей изучения микроскопию можно проводить при малом или большом увеличении с сухой или иммерсионной системами. В простейшем случае микроскопию осуществляют в затемненном поле зрения при суженной диафрагме и опущенном конденсоре. Более четкое изображение дают микроскопия в темном поле зрения, фазово-контрастная или аноптральная микроскопия (см. Микроскопические методы исследования). При приготовлении препаратов толщина предметных стекол не должна превышать 1,2 мм, а толщина покровных стекол - 0,17 мм. Предметные и покровные стекла должны быть чистыми и обезжиренными. При микроскопии в темном поле зрения препарат готовят как можно тоньше, а толщина покровных стекол не должна превышать 0,11 мм.

С. С. Белокрысенко.

Приготовление прижизненных (нативных) препаратов.

Культуры для приготовления препарата.

Материалы для исследования и техника взятия

Вопросы для рассмотрения

1. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Под редакцией Егорова Н.С. МГУ, М. 1995г. Стр. 81-97, 20-28.

2. Коротяев А.И., Бабичев С. А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. «Спец. литература». Санкт-Петербург, 1998. Стр. 14-18.

3. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. «Колос», М. 1972. Стр. 5-23.

ТЕМА: Приготовление микроскопических препаратов и их окраска.

1. Приготовление прижизненных (нативных) препаратов.

2. Приготовление мазков и их фиксация.

3. Красители, используемые в микробиологии.

4. Простые и сложные методы окраски.

Задание для выполнения лабораторной работы

1. Приготовить фиксированный препарат из молодой культуры дрожжей, окрасить его в течение 2-3 мин метиленовым синим и микроскопировать без иммерсии.

2. Приготовить фиксированный препарат из почвенной суспензии, окрасить по методу Грама, микроскопировать его и зарисовать.

3. Выполнить схематическое изображение клеточной стенки грамотрицательных и грамположительных прокариот.

Для приготовления препарата исследуемый материал берут из пробирки, колбы или чашки Петри бактериологической петлей, обоженной в пламени спиртовки или стерильной пипеткой.

Пробирку с бактериальной культурой берут в левую руку, а петлю за петледержатель в правую. Правой рукой вращательным движением вынимают из пробирки ватную пробку, зажимая ее между мизинцем и ладонью, а края пробирки обжигают в пламени спиртовки. Осторожно вводят петлю в пробирку, охлаждая ее о внутреннюю поверхность стекла, после чего легким скользящим движением берут материал. Затем вынимают петлю из пробирки, снова обжигают ее край и ватную пробирку и закрывают пробирку. После приготовления препарата петлю обязательно прожигают (стерилизуют) в пламени спиртовки.

Для исследования живых клеток микроорганизмов применяют методы «раздавленной и висячей капли». В обоих случаях возможно окрашивание объекта “прижизненными” красителями – “витальная” окраска.

На чистое предметное стекло наносят каплю воды. В каплю вносят культуру и смешивают с водой. Накрывают каплю покровным стеклом так, чтобы не образовались пузырьки воздуха. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному. Капля должна быть небольшой, не выходящей за края покровного стекла, но если суспензия попала за край - удаляют фильтровальной бумагой. Микроскопируют препарат с объективом 40Х. Метод удобен для исследования подвижности бактериальных клеток, а также просмотра крупных объектов - плесневых грибов, дрожжей. Применяют при изучении запасных веществ клетки. Метод “висячей” капли – используются для длительных наблюдений за клетками микроорганизмов. Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь её дна или края. Для микроскопии вначале используют малый сухой объектив 8Х, под увеличением которого находят край капли, а затем устанавливают иммерсионный объектив.



Прижизненная (витальная) окраска. Взвесь микроорганизмов вносят в каплю раствора метиленового синего или нейтрального красного в концентрациях от 0,001 до 0,00001%. Затем готовят препарат по одному из выше указанных методов и микроскопируют. После микроскопии препараты, «раздавленной» или «висячей» капли опускают в дезинфицирующий раствор.

Метод раздавленной капли

Применяется при исследовании морфологии и подвижности микроорганизмов.

Каплю микробной суспензии помещают на поверхность чистого обезжиренного предметного стекла. При работе с культурой, выросшей на твердой среде, на предметное стекло наносят каплю водопроводной воды, затем стерильной пипеткой берут небольшое количество культуры и перемешивают ее в капле. Покрывное стекло помещают ребром на предметное и осторожно помещают его на суспензию, следя за тем, чтобы между стеклами не было пузырьков воздуха. Избыток жидкости удаляют полоской фильтровальной бумаги.

Определение липолитической активности

Липолитические свойства культуры исследуют на среде определённого состава (бульон Штерна). Готовят бульон следующим образом: к 100 см 3 МПБ добавляют 1 см 3 глицерина и приливают 2см 3 свежеприготовленного 10 %-ного водного раствора сульфита натрия, затем по каплям 10 %-й спиртовой раствор основного фуксина (? 5 кап.).

Культуры культивируют в термостате при 37 0 С. Отмечают изменение цвета среды, рН (лакмусовой бумагой), помутнение, наличие хлопков.

Приготовление бактериальной суспензии

Стерильную жидкую синтетическую среду разливают в стерилизованные конические колбы по 100 см 3 .

Для получения биомассы исследуемой культуры микроорганизмов, делают посев на скошенный агар.

Подготовленные таким образом культуры инкубируют в термостате 24 ч при температуре (375)С, по окончании чего в пробирки с микроорганизмами вводят 5 см 3 соответствующей жидкой синтетической среды, осуществляя процесс механического воздействия. Приготовленную таким образом бактериальную суспензию вносят в колбы, содержащие по 100 см 3 соответствующей жидкой синтетической среды.

Культивирование микроорганизмов проводят в термостате при температуре 385С, с переменным механическим воздействием, осуществляемом на Shaker Type, с частотой колебаний 200 об/мин, амплитудой 6 по 1 ч в сутки.

Определение общего количества микроорганизмов (КОЕ)

Сущность метода заключается в определении в 1 см 3 воды общего содержания мезофильных аэробов и факультативных анаэробов при культивировании на синтетической питательной среде при температуре 40 С в течении 24 часов. Определение начинают с приготовления разведений. Для этого в несколько пробирок наливают 10 см 3 стерильной воды. В первую пробирку стерильной пипеткой добавляют 1 см 3 исследуемой воды. Новой стерильной пипеткой вносят пробу в пробирку со стерильной водой, после чего этой же пипеткой набирают 1 см 3 из приготовленного разведения и переносят во вторую, из второй в третью и т. д. Из каждой пробы делают посев не менее двух различных объемов, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках выросло от 30 до 300 колоний. По истечении 24 часов при температуре 40 С подсчитывают число выросших колоний. Если выросло большое количество колоний, то дно чашки делят на секторы и подсчет ведут в каждом отдельном секторе. Результаты подсчета выражают в количестве бактерий на 1 см 3 анализируемой воды с учетом посеянного объема.

Микроскопические одноклеточные организмы, называемые «микробы», а также некоторые бактерии, например, колиформные (формой напоминающие палочки) в огромном количестве содержатся в воде, особенно если она из природных источников - заросший и илистый пруд, ручей, лужа, речные заводи. Рассмотрим, как приготовить препарат «раздавленная капля», данный опыт считается простым и подходит в качестве начального обучения ребенка или начинающего биолога азам микроскопирования.

Препаратом называется подготовленная специальным образом для детального исследования на микроскопе биологическая ткань, микроорганизмы, субстрат. Изучение осуществляется на клеточном уровне, при этом функционирование органов или органоидов может быть остановлено действиями исследователя с применением фиксаторов. Неотъемлемой составной частью микропрепарата являются предметные и покровные стекла, между которыми он заключается для придания биоткани максимального плоского состояния, повышающего эффективность фокусировки на большом увеличении. Склеиваются стеклянные поверхности при помощи капли воды или бесцветной прозрачной пихтовой смолы. Пузырьки воздуха удаляются, края склейки протираются промокашкой. Если микропрепарат приготовлен для временного использования, стеклышки подлежат тщательной промывке, а отработанный образец уничтожению.

Последовательность, необходимая для приготовления препарата раздавленная капля , а также используемые инструменты:


Регистрация результатов наблюдения может происходить глазами или путем фотографирования. Для этого понадобится цифровая камера-окуляр, вставляющаяся вместо обычного в окулярную трубку и подключающаяся к компьютеру через последовательный порт USB. В этом случае картинка будет транслироваться на мониторе, пользователю будут доступны функции измерения размеров и углов, графическая обработка и фотосъемка.

Микромир, невидимый невооруженным зрением, способен впечатлить взрослых и детей, проявляющих интерес к науке. Микроскопия для многих становится не только элементом общеобразовательного процесса, но и увлекательным хобби. На что еще можно посмотреть в микроскоп, как делать микропрепараты с насекомыми, клетками лука, тонкими растительными срезами - вы можете прочитать в познавательных статьях и обзорах в тематическом блоге (раздел «Интересно»). Свои вопросы рекомендуем присылать в обратной связи или по электронной почте.

Loading...Loading...